ELISpot

Der ELISpot Assay ist eine Weiterentwicklung des ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay). Der Ablauf umfasst folgende Schritte:

• Beschichtung der Platte: Eine PVDF- oder Nitrocellulose-Mikrotiterplatte wird mit spezifischen Capture-Antikörpern beschichtet, die das zu analysierende Molekül (z.B. ein Zytokin) binden.
• Zellkultur: Die zu untersuchenden Zellen (meist T- oder B-Zellen) werden auf die Platte gegeben, inkubiert und stimuliert, um die Sekretion von Zytokinen oder Antikörpern zu induzieren.
• Bindung und Detektion: Die sezernierten Moleküle werden direkt in der Umgebung der jeweiligen Zelle an die immobilisierten Antikörper gebunden. Ein sekundärer enzymgekoppelter Antikörper erkennt das gebundene Molekül.
• Enzymmarkierung und Farbreaktion: Über das gekoppelte Enzym wird eine Farbreaktion ausgelöst, die als Punkt (Spot) sichtbar wird.
• Quantifizierung: Die Spots werden mittels Mikroskopie oder automatisierter Bildanalyse ausgezählt, wobei jeder Spot einer sezernierenden Zelle entspricht.

Aufgrund seiner hohen Sensitivität findet der ELISpot-Assay breite Anwendung in klinischen und wissenschaftlichen Forschungsbereichen wie:

• Immunüberwachung: Untersuchung von Immunantworten bei Infektionen, Krebs oder Autoimmunerkrankungen
• Impfstoffentwicklung: Bewertung von T-Zell- oder B-Zell-Reaktionen auf Impfstoffe
• Transplantationsforschung: Nachweis alloreaktiver T-Zellen bei Transplantationspatienten
• Infektionskrankheiten: Messung der Immunantwort auf Krankheitserreger wie HIV, Tuberkulose oder SARS-CoV-2.