Acridin-Orange-Test
Englisch: acridine orange test
Definition
Der Acridin-Orange-Test, kurz AOT, ist ein Spermienfunktionstest zur Beurteilung der DNA-Integrität von Spermien. Er dient dem Nachweis von DNA-Fragmentierung und Veränderungen der Chromatinstruktur im Spermienkopf. Der Test basiert auf den unterschiedlichen Fluoreszenzeigenschaften des Farbstoffs Acridinorange bei Bindung an einzel- bzw. doppelsträngige DNA.
Testprinzip
Acridinorange ist ein Fluoreszenzfarbstoff, der an Nukleinsäuren bindet. Je nach Struktur der DNA entstehen unterschiedliche Fluoreszenzsignale:
- grüne Fluoreszenz – Bindung an doppelsträngige DNA (intakte DNA)
- rote bzw. orange Fluoreszenz – Bindung an einzelsträngige DNA (fragmentierte DNA)
Nach einer kontrollierten Denaturierung der DNA werden die gefärbten Spermien mittels Fluoreszenzmikroskopie untersucht. Der Anteil rot fluoreszierender Spermien korreliert mit dem Ausmaß der DNA-Schädigung.
Durchführung
Für den Test wird ein Spermapräparat auf einem Objektträger fixiert und anschließend mit Acridinorange gefärbt. Nach einer sauren Denaturierung der DNA erfolgt die mikroskopische Auswertung unter einem Fluoreszenzmikroskop. Je nach Protokoll wird der Anteil geschädigter Spermien als prozentualer Anteil rot fluoreszierender Spermien angegeben.
Indikationen
Der Acridin-Orange-Test wird im Rahmen der erweiterten Fertilitätsdiagnostik eingesetzt, z.B. bei:
- pathologischem Spermiogramm
- wiederholtem Versagen von IVF oder ICSI
- Verdacht auf erhöhte DNA-Fragmentierung der Spermien
- Exposition gegenüber oxidativem Stress oder Toxinen
Aussagekraft
Ein erhöhter Anteil rot fluoreszierender Spermien kann mit einer reduzierten Fertilisationsfähigkeit der Spermien assoziiert sein. Die diagnostische Aussagekraft des Tests ist jedoch begrenzt, da verschiedene präanalytische Faktoren und unterschiedliche Testprotokolle die Ergebnisse beeinflussen können. Er ist deshalb kein Teil der andrologischen Routinediagnostik.
In der klinischen Praxis wird der AOT zunehmend durch andere Verfahren zur Bestimmung der Spermien-DNA-Fragmentierung ergänzt oder ersetzt, z.B.: