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== Definition ==
''Abkürzung für: '''E'''nzyme-'''L'''inked '''I'''mmuno'''Spot Assay'''''
'''ELISpot''', kurz für '''enzyme-linked''' '''immunosorbent spot assay''', ist eine [[Sensitiv|hochsensitive]] [[Immunologisch|immunologische]] Nachweismethode ([[Assay]]) zur [[Quantifizierung]] [[Sekretion|sekretierter]] [[Protein|Proteine]], insbesondere [[Zytokin|Zytokine]] oder [[Antikörper]], auf [[Zelle|Einzelzellebene]]. Die Methode basiert auf einer [[Enzymatisch|enzymatischen]] Farbreaktion.


== Definition ==
Eine Variante zum simultanen Nachweis mehrerer [[Analyt|Analyte]] ist der [[FluoroSpot]].
Der '''ELISpot Assay''' ist eine [[Sensitiv|hochsensitive]] [[Immunologisch|immunologische]] Methode zur Erkennung und Quantifizierung einzelner [[Zelle|Zellen]], die spezifische [[Zytokin|Zytokine]], [[Antikörper]] oder andere [[Protein|Proteine]] [[sezernieren]].  
 
== Ablauf ==
Der ELISpot Assay ist eine Weiterentwicklung des [[ELISA]] (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay). Der Ablauf umfasst folgende Schritte:


== Technik ==
* Beschichtung der Platte: Eine [[PVDF]]- oder [[Nitrocellulose]]-[[Mikrotiterplatte]] wird mit spezifischen Capture-Antikörpern beschichtet, die das zu analysierende Molekül (z.B. ein Zytokin) binden.
Zunächst wird eine [[Mikrotiterplatte]] mit einem Antikörper beschichtet, der gezielt das zu messende Molekül bindet. Anschließend werden die zu untersuchenden Zellen (meist [[T-Zelle|T-]] oder [[B-Zelle|B-Zellen]]) in die Wells gegeben und, falls erforderlich, stimuliert, sodass sie das Zielmolekül freisetzen. Das sezernierte Protein wird dann direkt von den Antikörpern auf der Platte eingefangen. Nach einer [[Inkubationszeit]] werden die Zellen entfernt und es erfolgt die [[Detektion]] mithilfe eines enzymgekoppelten Sekundärantikörpers der gegen ein anderes [[Epitop]] des sezernierten Proteins als der Primärantikörper gerichtet ist. Das an den Sekundärantikörper gebundene Enzym ist in der Lage, einen hinzugefügten [[Farbstoff]] durch Spaltung zu aktivieren, so dass die Enzymaktivität [[Photometrie|photometrisch]] erfasst werden kann: Sie ist proportional zur Menge des gebundenen Zielmoleküls. Anhand einer Kalibrationskurve kann die Konzentration des nachzuweisenden Proteins bestimmt werden. Der ELISpot Assay ermöglicht den Nachweis einer Immunantwort auf Einzelzellebene und ist somit hochsensitiv.
* [[Zellkultur]]: Die zu untersuchenden Zellen (meist [[T-Zelle|T-]] oder [[B-Zelle|B-Zellen]]) werden auf die Platte gegeben, [[Inkubieren|inkubiert]] und [[Stimulieren|stimuliert]], um die Sekretion von Zytokinen oder Antikörpern zu induzieren.
* Bindung und [[Detektion]]: Die [[Sekretion|sezernierten]] Moleküle werden direkt in der Umgebung der jeweiligen Zelle an die immobilisierten Antikörper gebunden. Ein sekundärer enzymgekoppelter Antikörper erkennt das gebundene Molekül.
* Enzymmarkierung und Farbreaktion: Über das gekoppelte Enzym wird eine Farbreaktion ausgelöst, die als Punkt (Spot) sichtbar wird.
* Quantifizierung: Die Spots werden mittels [[Mikroskopie]] oder automatisierter Bildanalyse ausgezählt, wobei jeder Spot einer sezernierenden Zelle entspricht.


== Indikation ==
== Anwendung ==
Aufgrund seiner hohen Sensitivität findet der ELISpot-Assay breite Anwendung in klinischen und wissenschaftlichen Forschungsbereichen wie:
Aufgrund seiner hohen Sensitivität findet der ELISpot-Assay breite Anwendung in klinischen und wissenschaftlichen Forschungsbereichen wie:


* Immunüberwachung: Untersuchung von [[Immunantwort|Immunantworten]] bei [[Infektion|Infektionen]], [[Krebs]] oder [[Autoimmunerkrankung|Autoimmunerkrankungen]].
* Immunüberwachung: Untersuchung von [[Immunantwort|Immunantworten]] bei [[Infektion|Infektionen]], [[Krebs]] oder [[Autoimmunerkrankung|Autoimmunerkrankungen]]
* [[Impfstoff|Impfstoffentwicklung]]: Bewertung von T-Zell- oder B-Zell-Reaktionen auf Impfstoffe.
* [[Impfstoff|Impfstoffentwicklung]]: Bewertung von T-Zell- oder B-Zell-Reaktionen auf [[Impfstoff|Impfstoffe]]
* [[Transplantationsmedizin|Transplantationsforschung]]: Nachweis [[Alloreaktiv|alloreaktiver]] T-Zellen bei Transplantationspatienten.
* [[Transplantationsmedizin|Transplantationsforschung]]: Nachweis [[Alloreaktiv|alloreaktiver]] T-Zellen bei [[Transplantation|Transplantationspatienten]]
* [[Infektionskrankheit|Infektionskrankheiten]]: Messung der Immunantwort auf Krankheitserreger wie [[HIV]], [[Tuberkulose]] oder [[SARS-CoV-2]].
* [[Infektionskrankheit|Infektionskrankheiten]]: Messung der Immunantwort auf [[Krankheitserreger]] wie [[HIV]], [[Tuberkulose]] oder [[SARS-CoV-2]].
[[Kategorie:Akronym]]
[[Kategorie:Immunologie]]
[[Kategorie:Labormedizin]]
[[Kategorie:Labormethode]]
[[Kategorie:Antikörper]]

Aktuelle Version vom 21. Februar 2025, 09:03 Uhr

Definition

ELISpot, kurz für enzyme-linked immunosorbent spot assay, ist eine hochsensitive immunologische Nachweismethode (Assay) zur Quantifizierung sekretierter Proteine, insbesondere Zytokine oder Antikörper, auf Einzelzellebene. Die Methode basiert auf einer enzymatischen Farbreaktion.

Eine Variante zum simultanen Nachweis mehrerer Analyte ist der FluoroSpot.

Ablauf

Der ELISpot Assay ist eine Weiterentwicklung des ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay). Der Ablauf umfasst folgende Schritte:

  • Beschichtung der Platte: Eine PVDF- oder Nitrocellulose-Mikrotiterplatte wird mit spezifischen Capture-Antikörpern beschichtet, die das zu analysierende Molekül (z.B. ein Zytokin) binden.
  • Zellkultur: Die zu untersuchenden Zellen (meist T- oder B-Zellen) werden auf die Platte gegeben, inkubiert und stimuliert, um die Sekretion von Zytokinen oder Antikörpern zu induzieren.
  • Bindung und Detektion: Die sezernierten Moleküle werden direkt in der Umgebung der jeweiligen Zelle an die immobilisierten Antikörper gebunden. Ein sekundärer enzymgekoppelter Antikörper erkennt das gebundene Molekül.
  • Enzymmarkierung und Farbreaktion: Über das gekoppelte Enzym wird eine Farbreaktion ausgelöst, die als Punkt (Spot) sichtbar wird.
  • Quantifizierung: Die Spots werden mittels Mikroskopie oder automatisierter Bildanalyse ausgezählt, wobei jeder Spot einer sezernierenden Zelle entspricht.

Anwendung

Aufgrund seiner hohen Sensitivität findet der ELISpot-Assay breite Anwendung in klinischen und wissenschaftlichen Forschungsbereichen wie: