Beutler-Test

Der Beutler-Test basiert auf einem enzymatischen Reaktionsprinzip, bei dem die Aktivität verschiedener Enzyme anhand der Umwandlung von NADP⁺ zu NADPH beurteilt wird. Die Reaktion wird durch Glucose-6-phosphat-Dehydrogenase (G6PD) katalysiert und erfordert Glucose-6-phosphat als Substrat. Dieses wird durch die Enzyme Galactose-1-phosphat-Uridyltransferase (GALT) und Phosphoglucomutase-1 (PGM1) synthetisiert. GALT ist dabei das geschwindigkeitsbestimmende Enzym. Ein angeborener GALT-Mangel ist Auslöser für die klassische Galaktosämie.

Zur Durchführung des Tests wird i.d.R. ein Tropfen Fersenblut des Neugeborenen entnommen. Dieses wird mit einem Reagenzgemisch versetzt, das NADP⁺ enthält. Je nachdem, welche Substrate hinzugegeben werden, kann die Aktivität der verschiedenen Enzyme überprüft werden:

• Galactose-1-phosphat und UDP-Glucose -> GALT
• Glucose-1-phosphat -> PGM1
• Glucose-6-phosphat -> G6PD

NADP⁺ wird enzymatisch durch G6PD zu NADPH reduziert. NADPH fluoresziert unter UV-Licht, sodass die Reaktion visuell ausgewertet werden kann.

Eine intensive Fluoreszenz weist auf normale Enzymaktivität hin. Eine schwache oder fehlende Fluoreszenz deutet dagegen auf eine verminderte oder fehlende Enzymaktivität hin und wird als positiver Beutler-Test gewertet.

Um das betroffene Enzym eindeutig zu identifizieren, ist eine weiterführende Diagnostik (z.B. eine molekulargenetische Untersuchung) notwendig.

• Roper et al. Laboratory diagnosis of G6PD deficiency. A British Society for Haematology Guideline. Br J Haematol, 189: 24-38. 2020
• Stuhrman et al., False-Positive Newborn Screen Using the Beutler Spot Assay for Galactosemia in Glucose-6-Phosphate Dehydrogenase Deficiency, JIMD Rep, 2017