CDNA-Bibliothek

Eine cDNA-Bibliothek enthält durch die Verwendung von mRNA nur die kodierenden Bereiche der DNA. Sie ist dadurch wesentlich kleiner als eine Genbibliothek und spiegelt das Genexpressionsmuster der verwendeten Probe zu einem bestimmten Zeitpunkt wieder. Diese cDNA-Fragmente werden in Plasmide integriert.

cDNA Konvertierung

• Isolation der mRNA aus einem Gewebe oder einer Zellart
• Oligo(dT)-Primer binden an den Poly-A-Schwanz der mRNA.
• Reverse Transkriptase synthetisiert den komplementären Strang.
• Eine RNase baut die mRNA ab.
• Eine DNA-Polymerase ergänzt den Doppelstrang der DNA.
• Lücken werden durch eine Ligase verschlossen.

Klonierung und Transformation

• An die Enden der cDNA-Fragmente werden synthetische Linker ligiert.
• Durch diese Linker können die Fragmente in Plasmide integriert werden.
• Sowohl Linker als auch Plasmid werden dafür mit demselben Restriktionsenzym geschnitten und kombiniert.
• Das Plasmid wird in ein Bakterium transformiert.

In der medizinischen Forschung können cDNA-Bibliotheken genutzt werden, um die Genexpression von zwei Proben zu vergleichen. Dies können verschiedene Patienten oder unterschiedliche Behandlungen sein. Durch den Einsatz von Gensonden kann überprüft werden, welche Gene in welcher Probe exprimiert werden.

• Anthony J.F. Griffiths: Introduction to Genetic Analysis. W.H. Freeman and Company, 2005, Seite 350-351.
• Klug, W. S. Concepts of genetics. 10th edn. Pearson Education, 2012, Seite 552-555