Hybridisierung

Unter Hybridisierung versteht man ein molekularbiologisches Verfahren, welches genutzt wird, um in der Praxis aus vorhandenen Nukleotideinzelsträngen mit Hilfe freier Nukleosidtriphosphate (ATP, GTP, CTP, TTP) und Primern komplementäre Stränge herzustellen.

Dem Verfahren geht eine Denaturierung der dsDNA voraus. Infolge einer Temperaturerhöhung auf 90°C werden die H-Brücken zwischen den Nukleotidbasen (Adenin und Thymin sowie Cytosin und Guanin getrennt.) Die freien Nukleotidbasen lagern komplementär an den gegebenen (Sense-)Strang. Durch nukleophilen Angriff der 3'-OH-Gruppe des freien Nukleotids an die 5'-Phosphatgruppe des vorherigen Nukleotids entsteht ein Ester und der Antisensestrang wird aufgebaut.