Bradford-Test
nach Marion McKinley Bradford (1946-), US-amerikanische Wissenschaftlerin
Synonym: Coomassie-Methode
Englisch: Bradford protein assay
Definition
Der Bradford-Test ist eine Färbemethode zum Nachweis von Proteinen mit Coomassie-Brillant-Blau.
Prinzip
Der Nachweis erfolgt über eine Verschiebung des Absorptionsmaximums des Coomassie-Farbstoffes von 465 nm zu 595 nm bei Proteinbindung im sauren Mileu. Es bindet sequenzunspezifisch an kationische und unpolare Aminosäurereste von Proteinen. Über die ermittelte Extinktion bei 595 nm kann mithilfe des Lambert-Beer'schen Gesetzes die Proteinkonzentration in der Lösung errechnet werden.
Spezifität
Im Vergleich zu anderen Färbemethoden für Proteine wie dem Lowry-Test oder dem BCA-Test kann der Bradford-Test sehr unterschiedliche Extinktionswerte bei gleicher Menge Protein hervorrufen. Der Bradford-Test ist jedoch schneller (ca. zehn Minuten Reaktionszeit bei Raumtemperatur) und störungsresistenter als die anderen Nachweismethoden.
Die Methode wird noch zur Proteinbestimmung in Liquor und Urin eingesetzt. Gesamteiweiß im Serum wird meist mithilfe der Biuret-Methode gemessen.
Referenzen
- Bradford MM. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding. Anal Biochem. 1976 May 7;72:248-54.