Exonukleasen sind Nukleasen, die zur Gruppe III der EC-Klassifikation der Enzyme gehören. Sie spalten die Bindung zwischen der 5'-Phosphatgruppe eines am Ende der Nukleinsäurekette befindlichen Nukleotids und der 3'-Hydroxylgruppe des benachbarten Nukleotids hydrolytisch.
Damit bauen Exonukleasen DNA (Desoxyribonukleasen) oder RNA (Ribonukleasen) von den Enden aus ab.
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